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PeproTech-ELISA试剂盒常见问题汇总

发布时间:2017-08-15

1. PeproTech的一个ELISA试剂盒(EDK)能检测多少块板?

一个标准ELISA试剂盒所含组分足够检测10块96孔板,而一块Mini ELISA试剂盒所含组分足够检测2块96块。

2. PeproTech ELISA试剂盒中所含的HRP结合物的稳定性如何?

ABTS ELISA试剂盒中的Avidin-HRP 在2-8℃最多稳定一个月,分装并冻存于-20℃以下则可最长稳定2年,避免反复冻融。TMB ELISA试剂盒中的链霉亲和素-HRP可以在2-8℃中稳定半年。

3. 如何获得试剂盒的交叉反应信息?

PeproTech在实验室内自行测试了其ELISA试剂盒的交叉反应性,可在说明书中查看测试结果。

4. ELISA实验过程中如果想周末停一下怎么办?

可以在周五用包被抗体包板,然后放4℃保存,下周一再继续实验,请注意:抗体包被时间的改变可能会引起板间结果的差异。

5. PeproTech的EDK是否适用于所有类型的样本?

虽然PeproTech没有用其试剂盒对每种样本进行测试,但这些试剂盒应该适用于(但不仅限于)以下标本:血清、血浆、细胞培养上清、尿液和唾液。

6. 显色反应需要终止吗?

Avidin-HRP和底物ABTS的显色反应是不需要终止的,当标准品的零孔OD值小于0.2,或最高浓度孔OD值小于1.2时,通常可以获得可靠的标准曲线,如要终止显色反应,可以用1%SDS作为终止液。虽然资料显示SDS是ABTS的最适终止液,但PeproTech并未在实验室中使用终止液。

7. PeproTech的ABTS EDK可以用TMB作为底物吗?

PeproTech的EDK是用ABTS进行优化的,因此最好使用ABTS作为底物,这些试剂盒也与TMB配合使用,但需要做一些调整:

? 试剂盒中的Avidin-HRP不能与TMB配对,必须另购链霉亲和素-HRP;

? 链霉亲和素-HRP的工作浓度需要优化;

? 使用链霉亲和素-HRP和TMB时,通常需用终止液,请按照说明书操作;

? 加终止液前,TMB的反应时间需要优化;

? 使用推荐的酶标板,并在450nm读取吸光值,校正波长为650nm。

8. EDK组分中为什么要添加D-甘露醇?

在EDK组分中加入D-甘露糖的目的是使蛋白/抗体可见,这不会影响ELISA的检测结果。

9. 是否可以将EDK说明书中的曲线作为我的标准曲线?

每块ELISA板必须单独做标准曲线,也就是说,一块板的标准曲线不能用于另一块板,PeproTech的EDK说明书中提供的标曲是在自己的实验室中做出来的,仅可用作示例。

10. PeproTech的标准曲线是如何生成的?

在实验室中做ELISA时,PeproTech会用Molecular Devices公司的酶标仪读取吸光值,然后用SOFTmax PRO软件进行结果分析,该软件能将获取的数据进行四参数曲线拟合。


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